fa کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB هلیکوباکتر پیلوری با استفاده از وکتور بیانی pcDNA3.1(+) علوم پزشکی / ژنتيک پزشکي Medical Sciences / Medical Genetics پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong>مقدمه:</strong> هلیکوباکتر پیلوری عامل بیماری هایی مانند گاستریت، زخم های گوارشی و سرطان غدد لنفاوی و دستگاه گوارشی است. هنوز واکسن موثری علیه هلیکوباکتر پیلوری تولید نشده است. آنزیم اوره آز یکی از عوامل مهم تحریک سیستم ایمنی میزبان است. بنابراین هدف این تحقیق کلون سازی و بررسی بیان ژن <em><span dir="LTR">ureB</span></em> به عنوان کاندیدای واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می باشد.</p> <p dir="RTL"><strong>روش کار:</strong> در این بررسی تجربی، ژن کد کننده ی <em><span dir="LTR">ureB</span></em> از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری به روش <span dir="LTR">PCR</span> جدا شد. محصولات <span dir="LTR">PCR</span> به روش کلون سازی <span dir="LTR">T/A</span> در وکتور <span dir="LTR">pTZ</span> درج شدند و سپس با آنزیم های <span dir="LTR">XhoI</span> و <span dir="LTR">XbaI</span> بریده شده و وارد وکتور بیانی <span dir="LTR">pcDNA3.1(+)</span> گردیدند. وکتور نهایی <span dir="LTR">pcDNA3.1(+)-<em>ureB</em></span> به روش الکتروپوریشن در سلول های <span dir="LTR">CHO</span> ترانسفرم شد. برای بررسی بیان پروتئین از روش <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> استفاده شد.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته ها:</strong> نتایج نشان دهنده تشکیل وکتور نوترکیب <span dir="LTR">pTZ-<em>ureB</em></span> می باشد. هضم آنزیمی و تعیین توالی نیز صحت کلونینگ ژن <em><span dir="LTR">ureB</span></em> در وکتور <span dir="LTR">pcDNA3.1(+)</span> را تایید کرد. نتایج الکتروپوریشن و سپس بررسی بیان ژن کلون شده در سلول های جانوری، تشکیل باند پروتئینی مورد نظر را روی ژل <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> نشان داد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه گیری: </strong>&nbsp;بر پایه نتایج حاصل، ژن <em><span dir="LTR">ureB</span></em> کلون شده در وکتور بیانی <span dir="LTR">pcDNA3.1(+)</span>، توان بیان و تولید محصول پروتئینی اختصاصی این ژن در سلول&shy;های یوکاریوتی را دارد. لذا سازواره نهایی <span dir="LTR">pcDNA3.1(+)-<em>ureB</em></span> از پتانسیل لازم برای بررسی ایمنی &shy;زایی در مدل حیوانی به عنوان واکسن ژنی برخوردار است.</p> <p></p> <p><strong>Introduction:</strong> Helicobacter pylori causes the gastritis, peptic ulcer, gastric cancer and lymphoma. There is no effective vaccine against this bacterium. Urease which is coded by ureB is one of the important stimulating agents for host immune system. The aim of this study was cloning and expression study of the ureB gene in order to create a gene vaccine against H. pylori.</p> <p><strong>Methods:</strong> In this experimental study, ureB gene was reproduced from Helicobacter pylori genome using PCR method. The PCR products were T/A cloned into pTZ vector and then digested with XhoI and XbaI enzymes and inserted to the pcDNA3.1(+) vector. pcDNA3.1(+)-ureB final construct was transformed in CHO cells using electroporation method. ureB gene expression was shown on a SDS-PAGE gel.</p> <p><strong>Results</strong><strong>:</strong> The results show that the pTZ-ureB recombinant vector was generated. The restriction digest and sequencing confirmed the correctness of the cloning of ureB into pcDNA 3.1(+) vector. The electroporation results and study of gene expression in animal cells showed the desirable protein band on SDS-PAGE gel.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> According to the results, the pcDNA3.1(+)-ureB expression vector can express the ureB gene product in eukaryotic cells. So the pcDNA3.1(+)-ureB final construct has a high potential as a DNA vaccine candidate for the evaluation of the immunogenicity in animal model.</p> <p><strong>Keywords: </strong>Helicobacter pylori, Recombinant vaccine, Gene cloning, ureB gene<span dir="RTL">.</span></p> <p></p> هلیکوباکتر پیلوری, واکسن ژنی, همسانه سازی, ژن ureB Helicobacter pylori, Recombinant vaccine, Gene cloning, ureB gene 82 91 http://journal.jmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-97-1&slc_lang=fa&sid=1 Samira Kheiri-Dastenaei سمیرا خیری دستنایی 1003194753284600912 1003194753284600912 No Department of Biology, Faculty of Basic Science,Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran. گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران. Abbas Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com 1003194753284600913 1003194753284600913 Yes Biotechnology Research Center, Islamic Azad University, Shahrekord Branch, Shahrekord, Iran. مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران.