Journal of Jiroft University of Medical Sciences

fa ویرایش ژن LINC00511 با تکنیک نوین CRISPR/Cas9 و بررسی اثرات آن بر رده سلولی سرطان ریه Editing of LINC00511 gene with a new CRISPR/Cas9 technique and evaluation of its effects on lung cancer cell line علوم پزشکی / ژنتيک پزشکي Medical Sciences / Medical Genetics پژوهشي Research <table align="left" cellpadding="0" cellspacing="0" hspace="0" vspace="0"> <tbody> <tr> <td style="padding: 0cm 9pt; vertical-align: top; text-align: justify;">مقدمه و هدف: سرطان ریه، دومین سرطان شایع در جهان است. رده سلولی COR-L105 بهعنوان یکی از معروفترین ردههای سلولی سرطان ریه در تحقیقات مختلف مورد استفاده قرار میگیرد. RNAهای غیر کدکننده بلند (lncRNAs)، دستهای از فاکتورهای مهم سلولی هستند که در فرآیندهایی نظیر رشد، تمایز، تکثیر، رونویسی، ترجمه و غیره نقش اساسی ایفا می کنند. نوعی lncRNA به نام LINC00511، یک تنظیم کننده رونویسی است و افزایش بیان آن در سرطانهای مختلف گزارش شده است. هدف از این تحقیق حذف ژن LINC00511 با استفاده از تکنیک پیشرفته CRISPR/Cas9 در سلولهای COR-L105 و بررسی اثرات آن بر پیشرفت سرطان و آپوپتوز است. روش کار: در این تحقیق تجربی، دو نوع sgRNA برای ژن LINC00511 طراحی و در دو وکتور کریسپری به صورت جداگانه کلون شدند. با استفاده از لیپوفکتامین، دو وکتور حامل sgRNAها به سلول های COR-L105 منتقل شدند. پس از تأیید حذف ژن LINC00511 از سلول های هدف، میزان تغییرات در تکثیر سلولی و آپوپتوز با روش های MTT و فلوسیتومتری سنجیده شد. علاوه بر آن، بیان ژن های مرتبط با آپوپتوز و تومورزایی به روش real time PCR مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: حذف ژن LINC00511 در اثر کریسپر، از ژنوم رده سلولی COR-L105 انجام شد. بیان ژنهای BCL2، survivin، EZH2، c-MYC و MAX در سلولهای تحت تیمار (ویرایش شده) نسبت به سلولهای گروه کنترل بهصورت معنیداری کاهش یافت (0/05>p). افزایش بیان ژن های p21 و p57 نیز در سلول های ویرایش شده دیده شد (0/05>p). کاهش تکثیر سلولی و افزایش میزان آپوپتوز در سلول های دست ورزی شده مشاهده شد. نتیجه گیری: تخریب ژن LINC00511 در سلول های رده سرطان ریه سبب بروز آپوپتوز و کاهش تکثیر سلولی گردید. بنابراین به نظر می رسد، جلوگیری از بیان ژن LINC00511 در سلولهای سرطانی، سبب کنترل تکثیر آنها میشود. </td> </tr> </tbody> </table> <div style="text-align: justify;"><div style="clear:both;"></div></div> <table align="center" cellpadding="0" cellspacing="0" hspace="0" vspace="0"> <tbody> <tr> <td style="text-align: justify;">Introduction:  Lung cancer is the second most common cancer in the world. The COR-L105 cell line is used as one of the most popular lung cancer cell lines in various studies. Long non-coding RNAs (lncRNAs) are a group of important cellular factors that play a key role in many processes such as growth, differentiation, replication, transcription, translation. LncRNA LINC00511 is a transcriptional regulator and has been reported to increase its expression in various cancers. The aim of this study was to knockout the LINC00511 gene using a CRISPR/Cas9 in COR-L105 cells and to investigate its effects on cancer progression and apoptosis. Methods:  In this experimental study, two sgRNAs were designed for LINC00511 gene and cloned into two CRISPR vectors, separately. Two sgRNAs vectors were transferred to COR-L105 cells using lipofectamine. After confirmation of LINC00511 gene knockout from target cells, changes in cell proliferation and apoptosis were assayed by MTT and flow cytometry. Furthermore, the expression of genes associated with apoptosis and tumorigenesis was examined by real-time PCR. Results: LINC00511 gene knockout from COR-L105 cell line was performed. The expression of BCL2, survivin, EZH2, c-MYC, and MAX genes showed a meaningful decrease related to the expression in treated cells (edited) compared to the control cells (p˂0.05). Increased expression of p21 and p57 genes was also seen in the edited cells (p˂0.05). Decreased cell proliferation and increased apoptosis were observed in manipulated cells. Conclusion: Knocking of LINC00511 gene in lung cancer cell line caused apoptosis and decreased cell proliferation. Therefore, inhibiting the expression of the LINC00511 gene in cancer cells leads to the control their proliferation.</td> </tr> </tbody> </table> <div style="text-align: justify;"><div style="clear:both;"></div></div> کریسپر, سرطان ریه, RNA غیر کدکننده, آپوپتوز CRISPR-Cas9, Lung cancer, Non-coding RNAs, Apoptosis 652 663 http://journal.jmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-97-2&slc_lang=fa&sid=1 Narjes Azadbakht نرجس آزادبخت 10031947532846005179 10031947532846005179 No PhD Student at Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran دانشجوی دکتری گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران Abbas Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com 10031947532846005180 10031947532846005180 Yes Associate Professor at Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran دانشیار مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران Mohammad-Saeid Jami محمد سعید جامی 10031947532846005181 10031947532846005181 No Assistant Professor at Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran , Assistant Professor at Cellular and Molecular Research Center, Basic Health Sciences Institute, Shahrekord University of Medical Sciences, Shahrekord, Iran استادیار گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران، استادیار مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، پژوهشکده علوم پایه سلامت، دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، شهرکرد، ایران