TY - JOUR JF - JJUMS JO - J Jiroft Univ Med Sci VL - 3 IS - 1 PY - 2016 Y1 - 2016/8/01 TI - Cloning and evaluation of expression of the Helicobacter pylori ureB gene by using pcDNA3.1(+) expression vector TT - کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB هلیکوباکتر پیلوری با استفاده از وکتور بیانی pcDNA3.1(+) N2 - مقدمه: هلیکوباکتر پیلوری عامل بیماری هایی مانند گاستریت، زخم های گوارشی و سرطان غدد لنفاوی و دستگاه گوارشی است. هنوز واکسن موثری علیه هلیکوباکتر پیلوری تولید نشده است. آنزیم اوره آز یکی از عوامل مهم تحریک سیستم ایمنی میزبان است. بنابراین هدف این تحقیق کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB به عنوان کاندیدای واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می باشد. روش کار: در این بررسی تجربی، ژن کد کننده ی ureB از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری به روش PCR جدا شد. محصولات PCR به روش کلون سازی T/A در وکتور pTZ درج شدند و سپس با آنزیم های XhoI و XbaI بریده شده و وارد وکتور بیانی pcDNA3.1(+) گردیدند. وکتور نهایی pcDNA3.1(+)-ureB به روش الکتروپوریشن در سلول های CHO ترانسفرم شد. برای بررسی بیان پروتئین از روش SDS-PAGE استفاده شد. یافته ها: نتایج نشان دهنده تشکیل وکتور نوترکیب pTZ-ureB می باشد. هضم آنزیمی و تعیین توالی نیز صحت کلونینگ ژن ureB در وکتور pcDNA3.1(+) را تایید کرد. نتایج الکتروپوریشن و سپس بررسی بیان ژن کلون شده در سلول های جانوری، تشکیل باند پروتئینی مورد نظر را روی ژل SDS-PAGE نشان داد. نتیجه گیری: بر پایه نتایج حاصل، ژن ureB کلون شده در وکتور بیانی pcDNA3.1(+)، توان بیان و تولید محصول پروتئینی اختصاصی این ژن در سلول­های یوکاریوتی را دارد. لذا سازواره نهایی pcDNA3.1(+)-ureB از پتانسیل لازم برای بررسی ایمنی ­زایی در مدل حیوانی به عنوان واکسن ژنی برخوردار است. SP - 82 EP - 91 AU - Kheiri-Dastenaei, Samira AU - Doosti, Abbas AD - Biotechnology Research Center, Islamic Azad University, Shahrekord Branch, Shahrekord, Iran. KW - Helicobacter pylori KW - Recombinant vaccine KW - Gene cloning KW - ureB gene UR - http://journal.jmu.ac.ir/article-1-90-fa.html ER -