دوره 8، شماره 2 - ( تابستان 1400 )                   جلد 8 شماره 2 صفحات 663-652 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print

ویرایش ژن LINC00511 با تکنیک نوین CRISPR/Cas9 و بررسی اثرات آن بر رده سلولی سرطان ریه
نرجس آزادبخت1 ، عباس دوستی 2، محمد سعید جامی3
1- دانشجوی دکتری گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
2- دانشیار مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران ، abbasdoosti@yahoo.com
3- استادیار گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران، استادیار مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، پژوهشکده علوم پایه سلامت، دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، شهرکرد، ایران
چکیده:   (1597 مشاهده)
مقدمه و هدف: سرطان ریه، دومین سرطان شایع در جهان است. رده سلولی COR-L105 به­عنوان یکی از معروف­ترین رده­های سلولی سرطان ریه در تحقیقات مختلف مورد استفاده قرار می­گیرد. RNA­های غیر کدکننده بلند (lncRNAs)، دسته­ای از فاکتورهای مهم سلولی هستند که در فرآیندهایی نظیر رشد، تمایز، تکثیر، رونویسی، ترجمه و غیره نقش اساسی ایفا می­ کنند. نوعی lncRNA به نام LINC00511، یک تنظیم­ کننده رونویسی است و افزایش بیان آن در سرطان­های مختلف گزارش شده ­است. هدف از این تحقیق حذف ژن LINC00511 با استفاده از تکنیک پیشرفته CRISPR/Cas9 در سلول­های COR-L105 و بررسی اثرات آن بر پیشرفت سرطان و آپوپتوز است.
روش کار: در این تحقیق تجربی، دو نوع sgRNA برای ژن LINC00511 طراحی و در دو وکتور کریسپری به­ صورت جداگانه کلون شدند. با استفاده از لیپوفکتامین، دو وکتور حامل sgRNA­ها به سلول ­های COR-L105 منتقل شدند. پس از تأیید حذف ژن LINC00511 از سلول­ های هدف، میزان تغییرات در تکثیر سلولی و آپوپتوز با روش ­های MTT و فلوسیتومتری سنجیده شد. علاوه بر آن، بیان ژن ­های مرتبط با آپوپتوز و تومورزایی به ­روش real time PCR مورد بررسی قرار گرفت.
یافته­ ها: حذف ژن LINC00511 در اثر کریسپر، از ژنوم رده سلولی COR-L105 انجام شد. بیان ژن­های BCL2، survivin، EZH2، c-MYC و MAX در سلول­های تحت تیمار (ویرایش شده) نسبت به سلول­های گروه کنترل به­صورت معنی­داری کاهش یافت (0/05>p). افزایش بیان ژن­ های p21 و p57 نیز در سلول­ های ویرایش­ شده دیده شد (0/05>p). کاهش تکثیر سلولی و افزایش میزان آپوپتوز در سلول­ های دست­ ورزی شده مشاهده شد.
نتیجه­ گیری: تخریب ژن LINC00511 در سلول­ های رده سرطان ریه سبب بروز آپوپتوز و کاهش تکثیر سلولی گردید. بنابراین به نظر می­ رسد، جلوگیری از بیان ژن LINC00511 در سلول­های سرطانی، سبب کنترل تکثیر آنها می­شود.
واژه‌های کلیدی: کریسپر، سرطان ریه، RNA غیر کدکننده، آپوپتوز
متن کامل [PDF 850 kb]   (1210 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: علوم پزشکی / ژنتيک پزشکي
دریافت: 1400/3/16 | پذیرش: 1400/6/15 | انتشار: 1400/6/29
بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.